Méthode M2
Méthode SPE/GC-FID pour détecter les stérols libres et estérifiés
Les huiles d'olive vierges sont l'une des composantes majeures du régime méditerranéen. Pour cette raison, il peut s'agir de produits assez chers et la fraude est fréquente. Par exemple, l'HOVE est souvent diluée avec d'autres huiles d'olive de qualité inférieure ou avec des huiles végétales moins chères, telles que les huiles de graines. Dans ce contexte, l'évaluation analytique de la composition des stérols est un outil bien établi pour évaluer la pureté des huiles d'olive, car elle dépend de l'origine botanique des huiles. Les méthodes qui sont disponibles (COI/T.20/Doc. Nº 26, Reg.(CEE) 2568/1991, Annex XIX) permettent de déterminer la composition totale des stérols, indépendamment du fait qu'ils soient sous forme libre ou estérifiée. Dans les différentes huiles végétales, les stérols peuvent être répartis différemment entre ces deux formes.
Pour ces raisons, une nouvelle méthode d'analyse pour la détermination des composés mineurs libres et estérifiés (cires, esters alkyliques, alcools gras libres, stérols libres et estérifiés, alcools triterpéniques libres et estérifiés, stérènes et tocophérols libres et estérifiés) des huiles d'olive et des huiles de graines a été proposée. La méthodologie, qui est axée non seulement sur la détection des stérols libres et estérifiés, mais aussi sur certains alcools triterpéniques caractéristiques, pourrait être utilisée comme outil de dépistage pour détecter l'adultération par les huiles de graines.
La procédure est assez simple, rapide et ne nécessite pas d'instruments coûteux et / ou complexes. Elle consiste en une dérivatisation directe des stérols libres des échantillons d’huile qui sont convertis en dérivés silylés. Leur polarité devient ainsi la même que celle des stérols estérifiés. L'échantillon d'huile est ensuite fractionné par extraction en phase solide pour éliminer les triglycérides et autres interférences de la matrice, et la fraction contenant les stérols libres et estérifiés est analysée par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire avec un injection de type « on-column ». Cette méthode offre la possibilité de détecter les mélanges illégaux d'huile d'olive et d'autres huiles végétales sur la base des résultats exprimés en pourcentage ou en concentration absolue des formes libres et estérifiées. Il faut toutefois souligner que la méthode proposée ici n'est pas destinée à remplacer la méthode des stérols totaux (COI/T.20/Doc. Nº 26, Reg.(CEE) 2568/1991, Annex XIX) car elles fournissent des informations différentes. Les deux méthodes pourraient être complémentaires et utilisées ensemble pour obtenir un degré d'information plus élevé concernant la nature de l'échantillon d'huile, et donc pour renforcer les méthodes d'analyse disponibles pour la prévention de la fraude.
La procédure analytique a été validée en interne avec une fidélité intra-laboratoire satisfaisante, le RSDr se situant entre 3 et 6 %. Ensuite, la première partie d'une étude internationale de validation de la méthode a été réalisée. À cette fin, dix laboratoires européens, ayant reçu deux échantillons différents d'huile d'olive, ont participé à l’étude « d'essai préliminaire ». Les participants ont reçu un mode opératoire standardisé (SOP) ainsi que des instructions pour la préparation et le stockage des échantillons. La fidélité inter laboratoire a été moins bonne que celle observée lors de la validation interne. Nombre des causes de ces résultats anormaux ont toutefois été identifiées et des mesures correctives ont été prises pour l'essai proprement dit. Les commentaires précieux fournis par les participants au sujet du mode opératoire standardisé ont conduit à l'ajout d'exigences de reporting pour l'essai proprement dit, afin de mieux évaluer si les laboratoires qui communiquent les résultats suivent correctement le mode opératoire.
L'essai préliminaire a réussi à identifier les causes des résultats aberrants et a permis plusieurs améliorations, en espérant que les données de performance de la méthode dans l'essai proprement dit, qui doit commencer en septembre 2020, seront satisfaisantes.
Pour l'Université d'Udine : Paolo Lucci