Méthode rapide de spectroscopie de fluorescence pour détecter la quantité de composés phénoliques lipophiles bioactifs (tocophérols ou vitamine E)

Les huiles d'olive fraîches contiennent une quantité variable de tocophérols, des molécules phénoliques lipophiles dotées de propriétés antioxydantes et vitaminiques (en particulier, l'alpha-tocophérol est un composé capable de jouer le rôle de vitamine E).
 

Cependant, comme ces composés sont sensibles à l'oxydation, leur niveau diminue lors du stockage de l'huile (en fonction des conditions adoptées et de la composition naturelle de l'échantillon d'huile).
 

L'analyse fluorescente des huiles d'olive tire parti de la présence de composants fluorescents naturels (par exemple, les chlorophylles et leurs dérivés), y compris les tocophérols.
 

L'analyse des spectres fluorescents des échantillons d'huile d'olive a été réalisée à l'aide d'un instrument équipé d'un lecteur de plaques noires à 96 puits.
 

Les mesures (excitation à 302 nm et émission à 328 nm) ont été effectuées en transférant directement une petite quantité d'échantillon d'huile (250 µl) sans traitement supplémentaire (comme la dilution et l'extraction, voir Figure 1).
 

Les résultats des analyses de fluorescence d'échantillons d'huile d'olive réalisées à l'aide de cet outil se sont révélés être en forte corrélation avec la quantification par CLHP de la teneur en alpha-tocophérol (voir Figure 2) et cette méthode a été validée en interne avec succès (par exemple en termes de paramètres comme la précision, l'exactitude, la LD, la LOQ, la robustesse).
 

Cette approche peut permettre un criblage rapide et à haut débit de la quantité totale de tocophérols dans les échantillons d'huile d'olive avec pratiquement aucune préparation de l'échantillon.
 

Figure 1 : Diagramme de flux du test - 250 µl d'huile d'olive vierge sont transférés dans une plaque de 96 puits et soumis à une analyse spectroscopique par fluorescence.

Figure 2 : Corrélation entre les concentrations d'alpha-tocophérol déterminées par un test spectroscopique de fluorescence et par la méthode de référence HPLC-FLD.