Metodo M3
Determinazione degli esteri etilici degli acidi grassi negli oli di oliva vergini mediante SPE-GC-FID
Il metodo M3 è stato sviluppato nell'ambito del WP4 "Soluzioni analitiche per l’autenticità dell'olio d'oliva ", in particolare nel task 4.2 "Identificazione di pratiche illegali (soft-deodorazione): strumenti analitici e marcatori". La procedura analitica consente l'isolamento della frazione che contiene gli esteri etilici degli acidi grassi (EEAG) presenti in oli di oliva vergini (VOO). In questo metodo viene proposta una cartuccia di silice da 1 g per l'isolamento degli analiti come alternativa rapida alla procedura preparatoria definita dall'allegato XX del Reg. CEE 2568/91 per la determinazione delle FAEE, che richiede un elevato volume di solventi e una procedura preparatoria molto lunga e complessa. La frazione isolata viene successivamente analizzata mediante GC-FID utilizzando una colonna a bassa polarità ed un’iniezione a freddo in colonna.
L’interesse nei confronti di tale determinazione risiede nel fatto che la valutazione analitica del contenuto di EEAG rappresenta uno dei parametri qualitativi che permette di definire la qualità di un VOO e di individuare miscele fraudolente di oli extra vergini di oliva con oli di qualità inferiore (vergini, lampanti o, indirettamente, alcune tipologie di olio soft-deodorato).
Lo schema del metodo M3 viene mostrato nella Fig. 1 sottostante. Il metodo è stato validato internamente per quanto riguarda la precisione intra ed inter-giorno, recupero, linearità, robustezza, limite di rilevazione (LOD), limite di quantificazione (LOQ) e precisione.
Fig. 1 Schema dell'isolamento della frazione EEAG mediante SPE
La valutazione della concordanza tra i risultati ottenuti applicando il metodo proposto e quelli ottenuti con la procedura di riferimento (allegato XX del Reg. CEE 2568/91) ha dimostrato che i due metodi sono equivalenti.
Nell’ambito del progetto OLEUM, il metodo M3 è stato selezionato per la validazione piena. Alla fase di studio di pre-trial hanno partecipato dieci laboratori a cui sono stati inviati due diversi campioni di olio vergine di oliva, i quali sono stati analizzati seguendo una procedura operativa standard (SOP – standard operation procedure) preparata dagli sviluppatori del metodo. I partecipanti hanno anche avuto l'opportunità di partecipare ad un workshop di addestramento a Siviglia (ottobre 2019). Nel corso di questo workshop hanno posto domande e fornito riscontri sull'applicazione della procedura analitica .
I punti deboli sollevati nello studio di pre-trial sono stati affrontati; una versione revisionata della SOP è stata realizzata ed inviata, insieme ai campioni, a diciassette laboratori partecipanti al trial proper I risultati ottenuti sono stati raccolti ed elaborati.
Il gruppo di ricerca per lo sviluppo del metodo M3 - Raquel B. Gómez-Coca, Mª del Carmen Pérez-Camino e Wenceslao Moreda (Instituto de la Grasa –CSIC)