Méthode M1
Détermination de la teneur totale en hydroxytyrosol et tyrosol par UHPLC dans l'huile d'olive aux fins de l'allégation de santé
La méthode M1 a été développée dans le cadre du projet « Accroître la confiance des consommateurs par rapport aux propriétés des HOV pour la santé : développement de méthodes de détermination des composés phénoliques ». Il s'agit de la détermination par UHPLC de la teneur totale en hydroxytyrosol (Htyr) et tyrosol (Tyr) dans l'huile d'olive, adaptée aux fins de l'allégation de santé introduite par le règlement CE 432/2012 pour les « polyphénols de l'huile d'olive ». Elle vise à quantifier la teneur totale en hydroxytyrsol (Htyr) et tyrosol (Tyr) de la fraction polaire de l'huile d'olive avant et après l'hydrolyse acide de leurs formes liées. Cette teneur peut être quantifiée avec précision en utilisant des étalons disponibles dans le commerce et elle est exprimée en Htyr et Tyr totaux (mg/20 g d'huile) après correction des différences de masse moléculaire entre les formes libres et liées. L'UHPLC a été utilisée pour accélérer l'analyse (Tsimidou et al., 2019, Molecules, 24(6), 1044 ; https://doi.org/10.3390/molecules24061044).
La méthode M1, représentée graphiquement sur la Fig. 1, a été validée en interne en termes de spécificité, de linéarité, de fidélité, de récupération et de robustesse, y compris la détermination de la Limite de Détection et de la Limite de quantification des analytes cibles. La procédure d'extraction n'a pas été validée car c'est celle proposée par le COI (COI/T.20/Doc. n° 29, 2009) sans l'ajout de l’étalon interne.
Fig. 1 Protocole UHPLC validé en interne et adapté à l'objectif de l'allégation de santé pour l'huile d'olive
Les résultats de la méthode M1 ont ensuite été comparés à ceux de la méthode COI (Méthode COI/T.20/DOC. 29/Rév. 1 - 2017, Détermination des biophénols dans les huiles d'olive par HPLC) comme indiqué dans une publication récente (Tsimidou et al., 2019, Molecules, 24(13), 2429 ; https://doi.org/10.3390/molecules24132429).
Selon les procédures du projet OLEUM, la méthode M1 a été sélectionnée pour une validation complète qui est effectuée en deux étapes. Treize laboratoires de l'UE, de Chine, des États-Unis et d'Australie ont participé à l'étude préliminaire entre septembre et décembre 2019. Les participants ont reçu deux échantillons différents d'huile d'olive vierge extra et ont été invités à les analyser selon un mode opératoire standardisé (SOP) préparé par les développeurs de la méthode. Les participants ont également eu l'occasion d'assister à un atelier de transfert de connaissances en octobre 2019 à Séville, au cours duquel ils ont posé des questions et donné leur avis sur l'application du protocole d'analyse et sur les informations données dans le SOP en particulier.
L'analyse des chromatogrammes et des résultats quantitatifs respectifs a permis d'identifier l'étape d'hydrolyse comme étant critique si les conditions exactes décrites dans le mode opératoire standardisé ne sont pas respectées. Les points faibles soulevés dans l'étude préalable à l'essai ont été traités dans la version révisée du SOP envoyée aux participants de l'essai proprement dit. De plus, un audio-vidéo de la méthode M1 comprenant des explications sur les calculs par des exemples, également produit par les développeurs, est disponible sur YouTube (https://www.youtube.com/watch?v=-nr45PnLnF4) via OLEUM pour faciliter la formation des acteurs intéressés. L'essai proprement dit est en cours.
Pour l'équipe de développement M1 de l'Université Aristote, Maria Z Tsimidou (Professeur) et Nikolaos Nenadis (Professeur Assistant)