Método M2

Método SPE/GC-FID para detectar esteroles libres y esterificados
 

Los aceites de oliva son uno de los componentes importantes de la dieta mediterránea. Por esa razón pueden ser productos bastante costosos donde es frecuente el fraude. Por ejemplo, el aceite de oliva virgen extra suele ser diluido con otros aceites de oliva de menor calidad o con aceites vegetales baratos, como aceites de semillas. En este contexto, la evaluación analítica de la composición de esteroles es una herramienta consolidada para valorar la pureza de los aceites de oliva, ya que dependen del origen botánico de los mismos. Los métodos que están disponibles (ISO 12228, COI/T.20/Doc. No. 10, Reg. (CEE) 2568/1991, Todos. V) son adecuados para determinar la composición total de esteroles independientemente de si están en forma libre o esterificada. En diferentes aceites vegetales, los esteroles pueden estar distribuidos de manera distintas entre estas dos formas. 
 

Por esta razón se ha propuesto un método analítico nuevo para la determinación de componentes menores libres y esterificados (ceras, ésteres alquílicos, alcoholes grasos libres, esteroles libres y esterificados, alcoholes triterpénicos libres y esterificados, esterenos, y tocoferoles libres y esterificados) en aceites de oliva y de semilla. La metodología, que está enfocada no solo en la detección de esteroles libres y esterificados, sino también en algunos alcoholes triterpénicos característicos, podría ser utilizada como herramienta de evaluación para detectar adulteración con aceites de semilla.
 

El procedimiento es muy simple, rápido y no requiere instrumentos caros y/o complejos. Consiste en una derivatización directa de los esteroles libres en las muestras de aceite, que son convertidos en derivados de sililo. De este modo su polaridad pasa a ser la misma que la de los esteroles esterificados. La muestra de aceite es fraccionada mediante extracción en fase sólida para la remoción de triacilgliceroles y otras interferencias de la matriz, y la fracción que contiene los esteroles libres y esterificados es analizada por GC en columna capilar. El método tiene el potencial de detectar mezclas ilegales de aceite de oliva y otros aceites vegetales, estando los resultados expresados en porcentajes o concentración absoluta de las formas libre y esterificada. Sin embargo, hay que destacar que el método aquí propuesto no tiene la intención de remplazar al método de esteroles totales (ISO 12228, COI/T.20/Doc. No. 10), ya que ambos proporcionan diferentes tipos de información. Los dos métodos podrían ser complementarios y utilizados en conjunto para obtener un mayor grado de información acerca de la naturaleza de la muestra de aceite y, por tanto, reforzar los métodos analíticos disponibles para la prevención de fraude.

 

El procedimiento analítico ha sido validado internamente con precisión intra-laboratorio satisfactoria (RSD entre 3 y  6 %). Seguidamente se llevó a cabo la primera parte de un estudio de validación. Para este propósito diez laboratorios europeos, que recibieron dos tipos diferentes de muestras de aceite de oliva, hicieron parte del estudio preliminar. Los participantes recibieron un Procedimiento Operativo Estándar (SOP) e instrucciones para la preparación y almacenaje de las muestras. La precisión intra-laboratorio fue peor que la observada durante la validación interna. Sin embargo, muchas de las causas de estos resultados anómalos han sido identificadas y se han tomado medidas correctivas para la validación formal. También se ha recibido retroalimentación sobre el SOP por parte de los participantes, lo cual ha servido para evaluar mejor si los laboratorios que están enviando resultados están siguiendo correctamente el mismo.
 

El ensayo preliminar identificó exitosamente las causas de los resultados anómalos y permitió varias mejoras. Se espera que los datos de desempeño del método en la validación formal, que debe comenzar en septiembre de 2020, sean satisfactorios.


 

Por la Universidad de Udine: Paolo Lucci