Método rápido de espectroscopia de fluorescencia
Un método para detectar la cantidad de compuestos fenólicos lipofílicos bioactivos (tocoferoles o vitamina E)
Los aceites de oliva frescos contienen una cantidad variable de tocoferoles, unas moléculas fenólicas lipofílicas que se caracterizan por su actividad antioxidante y vitamínica (específicamente el alfa-tocoferol es la forma capaz de desempeñar el papel de vitamina E).
Sin embargo, como estos compuestos son sensibles a la oxidación, su nivel disminuye durante el almacenamiento del aceite (dependiendo de las condiciones adoptadas y de la composición natural de la muestra de aceite).
El análisis fluorescente de los aceites de oliva aprovecha la presencia de componentes fluorescentes naturales (por ejemplo, clorofilas y derivados), incluidos los tocoferoles.
La obtención de los espectros de fluorescencia de las muestras de aceite de oliva se realizó utilizando un instrumento con un lector de placas negras de 96 pocillos.
Las mediciones (excitación a 302 nm y emisión a 328 nm) se realizaron transfiriendo directamente una pequeña cantidad de muestra de aceite (250 µl) sin ningún tratamiento adicional (como dilución y extracción, véase la Figura 1).
Los resultados de los análisis de fluorescencia de las muestras de aceite de oliva utilizando esta herramienta han resultado tener una alta correlación con la cuantificación por HPLC del contenido de alfa-tocoferol (véase la Figura 2) y este método fue validado con éxito en la empresa (por ejemplo, en términos de parámetros como precisión, exactitud, límite de detección, límite de cuantificación, robustez).
Este enfoque puede permitir una evaluación rápida y de alto rendimiento de la cantidad total de tocoferoles en muestras de aceites de oliva sin casi ninguna preparación de la muestra.
Figura 1: Diagrama de flujo del ensayo: se echan 250 µl de aceite de oliva virgen se transfieren en una placa de 96 pocillos y se someten a un análisis espectroscópico de fluorescencia.
Figura 2: Correlación entre las concentraciones de alfa-tocoferol determinadas por el ensayo espectroscópico de fluorescencia y por el método de referencia HPLC-FLD.